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    臨床ELISA測定中可能會出現的問題

    發布時間: 2016/2/17  點擊次數: 874次
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    盡管ELISA測定的操作步驟非常簡單,但有可能會影響測定結果的因素卻較多,分布在測定操作的各步之中,尤以加樣、溫育和洗板為甚。為幫助大家分析查找測定中出現問題的可能原因,特對常見問題及原因歸納總結于下表。   
    臨床ELISA測定中可能會出現的問題及可能的原因問題 
    可能的原因(非試劑盒本身的原因) 

    1.弱陽性質控樣本檢測不出 溫育的時間或溫度不夠;顯色反應時間太短;所用配制緩沖液的蒸餾水有問題 
    2.測定的重復性差 (相同樣本兩次測定結果不一致) 這是典型的由測定操作引起的問題,包括 
    (1)加樣本及試劑量不準;孔間不一致; 
    (2)加樣過快,孔間發生污染; 

    (3)加錯樣本; 

    (4)加樣本及試劑時,加在孔壁上部非包被區; 
    (5)不同批號試劑盒中組分混用; 
    (6)溫育時間、洗板、顯色時間不一致; 
    (7)孔內污染雜物; 
    (8)酶標儀濾光片不正確; 

    (9)血清標本未*凝固即加入,反應孔內出現纖維蛋白凝固或殘留血細胞,易出現假陽性反應等。
     3.白板 
    (陽性對照不顯色) 
    (1)漏加酶結合物; 

    (2)洗板液配制中出現問題,如量筒不干凈,含酶抑制物(如疊氮鈉)等。 
    (3)漏加顯色劑A或B; 
    (4)終止劑當顯色劑使用。 

    4.全部板孔均有顯色 
    (1)洗板不干凈; 
    (2)顯色液變質; 

    (3)加底物的吸光受酶污染; 
    (4)洗板液受酶等污染。
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